Pa fethodolegau synthesis y mae Biorunstar yn eu defnyddio ar gyfer synthesis peptidau?
RE: Mae Biorunstar wedi datblygu gwahanol fethodolegau synthesis cyfnod datrysiad i fodloni gofynion cwsmeriaid. Fel arfer, defnyddir cemeg Fmoc cyfnod solet.
Sut ydych chi'n llongio peptidau? Pa ddata QC fydd yn cael ei ddarparu?
RE: Bydd pob peptid yn cael ei gludo gan DHL neu FedEx express fel mewn powdr lyophilized mewn ffiolau unigol wedi'u labelu'n dda, ar dymheredd ystafell. Ac eithrio peptidau crai, a fydd yn cael eu gwirio gan sbectrometreg MALDI-MASS yn unig, daw'r holl peptidau puro synthetig gydag adroddiad prosiect (CoA), data MS a data HPLC. darperir taflenni data sy'n cynnwys y nodweddion allweddol, megis dilyniant peptid, purdeb, maint, addasiad, data sbectrwm màs a data HPLC.
Beth yw'r amser troi arferol ar gyfer synthesis peptidau? Pa mor hir mae'n ei gymryd i anfon ataf?
RE: Ein hamser troi arferol yw 2-3 wythnos ar gyfer peptid safonol o dan 30 o asidau amino. Mae'r amser troi yn amrywio yn dibynnu ar hyd y peptid, maint, hydoddedd ac anhawster. Yn nodweddiadol 3-5 diwrnod i gyrraedd ymchwilwyr mewn gwledydd eraill.
Pa mor hir y gallwch chi syntheseiddio?
RE: Mae gan Biorunstar brofiad helaeth o syntheseiddio peptidau hir, hyd at 130aa. Yn wahanol i lawer o gyflenwyr peptidau sydd ond yn gyfforddus wrth wneud peptidau o dan 30 neu 40aa, mae gan Biorunstar brofiad da o wneud peptidau yn amrywio o 40aa i 90aa. Mae'n anodd syntheseiddio peptidau hir, yn enwedig 100aa neu hirach. Os ydych chi'n bwriadu syntheseiddio dilyniant o 130aa neu fwy, cysylltwch â ni ar gyfer mynegiant protein personol a gwasanaeth puro.
Beth os bydd rhai problemau'n codi yn ystod y broses synthesis neu buro?
RE: Mae gan bob peptid ei nodweddion penodol. Os bydd rhai problemau'n digwydd yn ystod y synthesis y tu hwnt i'n disgwyliad, ac ni allwn gyflwyno'ch peptid mewn pryd, byddwn yn eich hysbysu cyn gynted â phosibl. Ar hap nad ydym yn gallu gwneud y peptid, ni chodir tâl arnoch am unrhyw gostau.
Ffurf halen TFA, ffurf halen Asetad neu HCl: Pa ffurf ddylwn i ei dewis?
Yn ddiofyn, mae peptidau yn cael eu syntheseiddio mewn halen TFA. Ar gyfer arbrofion sy'n ymwneud â meithriniad celloedd neu feinwe, dylech ystyried cynhyrchu peptidau ar ffurf halen asetad neu HCl ar 98% neu uwch er mwyn osgoi ymatebion annormal. Gellir gofyn am ffurflen halen asetad neu HCl am gost ychwanegol.
Beth yw oes silff peptid?
RE: Mae peptidau yn sefydlog am o leiaf blwyddyn os cânt eu storio'n lyoffileiddio yn y rhewgell. Os caiff peptidau eu toddi efallai y bydd yr oes silff yn cael ei leihau. Os yw peptidau yn cynnwys nifer o asidau amino adweithiol y gellir eu ocsidio fel Trp, Met ond yn enwedig Cys, efallai y bydd yr oes silff hefyd yn cael ei leihau.
Mae'r peptid yn cynnwys sawl cystein ac felly gall ffurfio bondiau disulfide yn hawdd. Sut mae osgoi hyn?
RE: Os yw'r dilyniant peptid yn cynnwys sawl cystein, neu asidau amino adweithiol eraill, sy'n hawdd eu ocsidio, mae Biorunstar yn cynnig danfon y peptid gydag olion y DTT reductant cryf. Dim ond os caniateir hyn yn benodol gan y cwsmer y caiff y peptid ei ddosbarthu gyda DTT.
Sut mae storio fy peptidau synthetig?
RE: Bydd y rhan fwyaf o peptidau lyophilized yn sefydlog ar dymheredd ystafell am 2-3 wythnos. Ar gyfer storio hirdymor, dylech storio peptidau lyophilized ar -20 gradd . Dylid osgoi cylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro. Caniatáu i ddod i dymheredd ystafell cyn agor. Mae oes silff atebion peptid yn gyfyngedig; dylid defnyddio hydoddiant peptid ar ôl ei baratoi cyn gynted â phosibl.
Beth yw'r purdeb ar gyfer y peptid crai a'r peptid heb halen? Sut ydych chi'n puro'r peptid? Beth yw'r amhureddau?
RE: Ar gyfer peptidau byr gyda dilyniannau arferol o dan 15aa, yn gyffredinol mae'n 40-60% gan HPLC ar gyfer gradd crai; 50-70% gan HPLC ar gyfer gradd wedi'i dadhalwyno. Po hiraf y peptid, yr isaf yw'r purdeb ar gyfer crai neu ddihalwyno. Yn gyffredinol, caiff peptidau eu puro gan HPLC gan ddefnyddio graddiant dŵr a asetonitrile. Mae'r rhan fwyaf o amhureddau yn ddarnau neu beptidau dileu, peptidau wedi'u dad-amddiffyn yn anghyflawn, a halen a dŵr gweddilliol.
Esboniad o Purdeb Peptid gan HPLC, Cyfanswm Cynnwys Peptid a Chynnwys Peptid Targed.
RE: Mae Biorunstar yn llongau peptidau yn ôl pwysau gros y powdr lyophilized. Mae'r powdr lyophilized yn cynnwys amhureddau megis darnau neu beptidau dileu, peptidau anghyflawn wedi'u dad-amddiffyn, TFA a dŵr gweddilliol. Mae Purdeb Peptid yn cael ei fesur gan HPLC. Dyma'r swm o peptid cywir o'i gymharu â'r holl ddadansoddau sy'n amsugno ar ~214 nm (mae'r bond peptid yn amsugno), yn fwyaf tebygol o ddileu, cwtogi neu ddilyniannau wedi'u dad-amddiffyn yn anghyflawn, ac ati. Nid yw purdeb peptid gan HPLC yn ystyried dŵr a halwynau sydd fel arfer yn bresennol yn y sampl. Cyfanswm y Cynnwys Peptid yw canran cyfanswm y peptidau sy'n bresennol o'i gymharu â phopeth sy'n bresennol yn y powdr peptid lyophilized. Mae cyfanswm y cynnwys peptid yn cael ei bennu gan ddadansoddiad cynnwys nitrogen. Felly gellir casglu Cynnwys Peptid Targed yn y powdr peptid lyophilized gan y fformiwla: Cyfanswm Cynnwys Peptid X Purdeb Peptid gan HPLC.
Beth yw'r dull o labelu Fluorescein?
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanate) yw'r rhagflaenydd actifedig a ddefnyddir ar gyfer labelu Fluorescein. Ar gyfer y labelu Nterminal effeithlon, aminohexanoyl saith-atom
mewnosodir gofodwr (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) rhwng y fflworoffor (fflworoscen) a'r N-terminws y peptid. Mae'r peiriant gwahanu hwn yn helpu i wahanu'r fflworoffor o'i bwynt ymlyniad, gan leihau'r rhyngweithiad rhwng y fflworoffor a'r biomoleciwl y mae wedi'i gyfuno ag ef a'i wneud yn fwy hygyrch i adweithyddion canfod eilaidd.
A yw labelu C-terminal o Biotin (neu FITC) yn bosibl?
RE: Ydw. Gwneir labelu terfynell C ar Biotin (neu FITC) trwy ychwanegu gweddillion Lysine ar derfyn C peptid, ac mae Biotin (neu FITC) ynghlwm wrth gadwyn ochr Lysine trwy fond amid. Mae gwefr bositif Lysine yn cael ei ddileu.
Beth yw'r hyd peptid priodol ar gyfer cynhyrchu gwrthgyrff?
RE: Yn gyffredinol, argymhellir peptid gweddillion 10-25. Gallai peptid hirach gael mwy o epitopau, ond gallai hefyd fod â mwy o siawns o ffurfio strwythurau eilaidd sefydlog nad ydynt yn ffurfiau brodorol. Peptid byrrach (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Beth yw MAP?
RE: Mae MAPS neu Peptid Aml-Antigenig yn peptid canghennog lle mae cadwyni peptid llinol wedi'u cysylltu yn eu terminws C trwy graidd polylysin, gan gynyddu maint y moleciwl cyfan. Gwneir hyn i ddileu cyplu peptidau â KLH. Mae'n ymddangos, fodd bynnag, bod cydffurfiad peptidau ar MAP yn llai hyblyg, ac mae gwrthgyrff a geir gan MAP fel arfer yn adnabod protein targed yn llai aml na thrwy gydgysylltiad KLH confensiynol. Yn ogystal, nid oes unrhyw peptid rhad ac am ddim yn cael ei gynhyrchu wrth wneud MAPS, gan ei gwneud hi'n anodd cael gwared ar wrthgyrff craidd polylysin. Mae puro MAPS gan HPLC yn anodd, a darperir MAPS heb wiriad torfol oherwydd ei heterogenedd a'i faint moleciwlaidd mawr.
Pam mae fy nhoddiant peptid cyfun KLH yn ymddangos yn gymylog?
RE: KLH neu Limped Limped Mae Hemocyanin yn brotein agregu mawr (MW=4x105 – 1x107). Oherwydd ei faint a'i strwythur, mae ei hydoddedd mewn dŵr yn gyfyngedig, gan achosi ymddangosiad cymylog. Ni fydd hyn yn effeithio ar imiwnogenigrwydd a gellir defnyddio'r toddiant cymylog ar gyfer imiwneiddiadau.
Allwch chi egluro'r brigau màs M+Na a M+K mewn sbectra MALDI?
AG: Mae'n gyffredin iawn gweld Na (sodiwm) a K (potasiwm) yn dod yn y sbectrwm MALDI. Daw'r sodiwm a photasiwm o'r dŵr a ddefnyddir yn y toddyddion peptid. Mae gan hyd yn oed ddŵr distylledig a dŵr wedi'i ddadïoneiddio symiau hybrin o ïonau sodiwm a photasiwm, na ellir byth eu tynnu'n gyfan gwbl. Mae'r rhain yn cael eu ïoneiddio yn ystod proses fanyleb màs MALDI ac yn rhwymo i grwpiau carboxyl rhydd y peptid. Gan nad oes system puro dŵr a fydd yn tynnu pob un sodiwm neu ïon potasiwm o ddŵr, mae gweld y sodiwm a'r potasiwm adducts ar adegau yn gyffredin iawn ac yn anochel ym manyleb màs MALDI. Nid yw hyn yn arwydd nad yw'r peptid yn bur, ac ni ddylid ei gymysgu â phwysau moleciwlaidd anghywir.