Beth Yw Synthesis Peptid

 

Mae synthesis peptid yn faes gweithredol mewn cemeg protein a pheptid, sydd fel arfer yn cynnwys ychwanegu asidau amino yn ddilyniannol mewn trefn ddiffiniedig i ffurfio'r gadwyn peptid trwy ddulliau cemegol. Y prif ddulliau synthesis yw synthesis hylif-cyfnod a chyfnod solet. O'i gymharu â LPPS, mae gan SPPS y manteision o fod yn gyflymach, yn symlach, gyda llai o adweithiau ochr, a chynnyrch uwch.

 

Dull SPPS safonol, gan gynnwys strategaethau Boc (bensyl) a Fmoc ( tBu ).

 

 

Strategaeth Boc ( bensyl ).

Yn y dull synthesis hwn, defnyddir resinau polystyren cloromethylated, hydroxymethylated a p-methoxybenzyl (PMA) fel cynhalwyr solet. Mae'r grŵp -amino wedi'i warchod â t-butoxycarbonyl (Boc), tra bod grwpiau cadwyn ochr o asidau amino yn cael eu hamddiffyn â deilliadau bensyl. Mae'r grŵp Boc yn cael ei dynnu gan ddefnyddio TFA neu TFA taclus yn CH2Cl2, ac ar ddiwedd y synthesis, mae grwpiau gwarchod cadwyn ochr a chysylltiadau resin peptid yn cael eu tynnu gydag asid cryf fel asid hydrofluorig anhydrus (HF) neu TFMSA.

 

Strategaeth Fmoc ( tBu ).

Yn y dull synthesis hwn, defnyddir Wang-resin, 2-Resin Chlorotrityl Cloride, Rink amide-AM Resin, Rink amide-MBHA resins fel cynhalyddion solet. Mae'r grŵp -amino wedi'i warchod â 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc). ), tra bod grwpiau cadwyn ochr o asidau amino yn cael eu hamddiffyn â grwpiau diogelu asid-labile. Mae'r grŵp Fmoc yn cael ei ddileu gan ddefnyddio piperidine 20% yn DMF, ac ar ddiwedd y synthesis, mae grwpiau gwarchod cadwyn ochr a chysylltiadau resin peptid yn cael eu dileu gyda 1%-95% TFA. Ar hyn o bryd Fmoc SPPS yw'r dull dewisol ar gyfer synthesis peptidau.

 

Egwyddorion Sylfaenol Synthesis Peptid Cyfnod Solid Fmoc

 

Dewiswch Resin

Y resinau a ddefnyddir yn fwyaf eang yn Fmoc SPPS gan gynnwys 4-Resin alcohol alkoxybenzyl (Wang), 2- resin clorotrityl clorid, Rink Amide Resin, Rink Amide-MBHA resins. Defnyddir resinau amid ar gyfer synthesis peptidau gyda amidation terfynell C gofynnol. Mae resin Wang a resin 2-Cl Trt yn cael eu defnyddio'n gyffredin ar gyfer synthesis peptid gyda COOH heb derfynell C gofynnol. Ond pan fo gan derfynfa C y peptid Pro a Gly fel yr asid amino cyntaf, ni ddylid defnyddio resin Wang oherwydd y risg o ffurfio DKP (dikettopiperazine), 2- Argymhellir defnyddio Resin Cloridyl Clorid.

 

 

Atodi asidau amino gwarchodedig i resinau

Mae'r asid amino Fmoc cyntaf ynghlwm wrth resin cynnal anhydawdd trwy gysylltydd labile asid.

 

Amddiffyn y grŵp amddiffyn -amino

Mae'r grŵp amddiffyn Fmoc dros dro ar derfyn N y resin peptidyl yn cael ei dynnu trwy ei drin â thoddiant o 20% piperidine yn DMF. Mae'r adwaith hwn fel arfer yn gorffen o fewn 10 i 20 munud.

 

Golchi camau

Ar ôl pob adwaith cemegol, mae camau golchi yn cael eu perfformio i gael gwared ar adweithyddion gormodol, sgil-gynhyrchion, a moleciwlau heb adweithio o'r resin. Mae hyn yn helpu i gynnal purdeb y gadwyn peptid sy'n tyfu.

 

Ysgogi a chyplu'r asid amino gwarchodedig

Mae'r asid amino gwarchodedig sydd wedi'i rwymo i'r resin yn cael ei actifadu i wella ei adweithedd ar gyfer cyplu â'r asid amino nesaf yn y dilyniant. Mae asiantau actifadu cyffredin yn cynnwys HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU a HATU. Mae cyplu yn golygu ffurfio bond peptid rhwng yr asid amino actifedig a grŵp amino y gadwyn peptid sy'n tyfu. Yn nodweddiadol, defnyddir prawf Kaiser i fonitro cyflawnrwydd adweithiau cyplu.

 

Golchi camau

Yn debyg i gamau golchi cynharach, mae hyn yn sicrhau bod gormod o adweithyddion a sgil-gynhyrchion yn cael eu tynnu ar ôl yr adwaith cyplu.

 

Holltiad o resin a dad-ddiogelu grwpiau gwarchod cadwyn ochr

Unwaith y bydd y dilyniant peptid a ddymunir wedi'i syntheseiddio ar y resin, caiff ei hollti o'r gefnogaeth solet gan ddefnyddio coctel holltiad fel asid trifluoroacetig (TFA) sy'n cynnwys sborionwyr fel thioanisole a dŵr. Ar yr un pryd, mae grwpiau gwarchod cadwyn ochr ar weddillion asid amino yn cael eu tynnu, gan ddatgelu'r peptid sydd wedi'i ddadamddiffyn yn llawn yn barod i'w buro a'i ddadansoddi.